以十二烷基硫酸钠( SDS) - 正丁醇- 正庚烷- 水微乳系统为流动相,预制聚酰胺薄层板为固定相,通过调节微乳系统的极性,较好地分离出十几种银杏叶黄酮. 与传统的流动相系统———有机溶液系统相比,微乳系统显示出较强的分离优势. 对银杏叶黄酮作薄层色谱指纹图谱分析,以寻求简便、合理的标准质量控制方法.
关键词:银杏叶;黄酮;微乳液;薄层色谱;指纹图谱
银杏叶提取物( GBE)具有独特的药理活性及巨大的临床应用价值. 它的化学成分较为复杂,迄今为止已从银杏叶中分离出大量的极性和非极性化合物. 作为中药,如何评定其稳定性,建立客观的质量控制方法,成为亟待解决的课题之一.
国家药品监督管理局在中药注射剂质量标准中引入指纹图谱技术要求,指南中的“色谱指纹图谱”指采用柱色谱及薄层色谱等各种色谱技术实验研究的指纹图谱[ 1 ] . 对于银杏叶中药制剂的指纹图谱研究较少.游松等曾用HPLC方法建立了银杏叶药材、中间体及其注射剂的指纹图谱[ 2 ] . 但建立种方法须使用昂贵的高效液相色谱仪,且对银杏叶提取物(GBE)的纯度要求高,不易制得. 而薄层色谱作为中药的鉴别方法,由于其具有快速、分析成本低、尤其可以提供形象直观的彩色的图像,为其它色谱技术所不能的特点而为中药分析工作者广泛使用. 用于中药指纹图谱分析,它的这一优势得到充分发挥. 指纹图谱强调的是图谱的整体性和模糊性,它既可以表达有良好重现性的指纹特征,又能包容样品之间的差异. 用于GBE薄层色谱指纹图谱的文献尚未见报道.微乳液的研究是建立在胶束色谱理论[ 3 ]之上的.微乳液通常是由表面活性剂、助表面活性剂、油、水等组分在适当配比下自发生成的、无色透明低粘度的热力学稳定体系. 在微乳色谱中,溶质在固定相、油或水连续相及内核和介面膜等数相之间进行分配. 层附过程中,由于吸附、分配、静电、疏水、立体、萃取与反萃取等可能的效应,导致各种物质迁移速率不同而使Rf值有差异.
笔者以含水量不同的十二烷基硫酸钠- 正丁醇-正庚烷- 水微乳液[ 4 - 7 ]为展开剂进行薄层色谱分析方法,通过调节微乳系统的极性,较好地分离出十几种银杏黄酮得到了较好的指纹图谱. 这将有助于银杏叶药材的标准化种植,银杏叶提取物及其制剂的质量控制.
1 仪器与材料
1) 仪器与药品
薄层色谱紫外分析仪(天津市琛航科技仪器有限公司) 、自动点样仪(天津市琛航科技仪器有限公司) 、定量毛细管(天津市琛航科技仪器有限公司) 、双槽展开缸(重庆玻璃仪器厂) 、电吹风、聚酰胺预制板(台州四青生化材料厂) 、新型喷雾瓶(华西医科大学仪器厂) 、十二烷基硫酸钠( SDS) ,正丁醇,正庚烷,三氯化铝,乙醇均为分析纯.对照品:芦丁、槲皮素、GBE样品(均为中国药品生物制品检定所出品).
2) 实验材料
银杏叶, 2002年购于贵州大学.
2 实验方法
2. 1 展开剂系统的筛选
1) 传统展开剂系统
传统展开剂系统一般为油液系统,极性较小. 本实验用甲苯、醋酸乙酯和吡啶以不同比例作为展开剂,都仅能展开两三点. 不能较好分离银杏黄酮.
2) 微乳液系统的配制
按照十二烷基硫酸钠( SDS) ∶正丁醇∶正庚烷=13. 77 ∶15. 6 ∶2. 7 (重量比)称取各试剂,加少量水制成微乳液. 再依据微乳液的比例,加适量水,静置24 h备用.
2. 2 配制供试品GBE液
取不同批次的银杏叶,剪碎后用甲醇提取,收集甲醇提取液、干燥后为棕黄色粉末. 分别称取各批粉末适量配制甲醇溶液.
2. 3 配制对照标液
称取芦丁,槲皮素标准样品配制成1 mg/mL甲醇溶液,作为对照标准溶液.
2. 4 配制指纹图谱对照液
称取中国药品生物制品检定所提供的银杏叶黄酮样品配制成2 mg/mL甲醇溶液,作为对照品.
2. 5 高效薄层色谱方法
用定量毛细管吸取对照品溶液、对照标液、GBE样品液于聚酰胺膜上点样,直径约1 mm,吹干. 以不同含水量的微乳液为展开剂,于已饱和的双槽展开缸中展开10 cm,取出烘干. 均匀喷洒1%氯化铝乙醇溶液,烘干,于365 nm紫外灯下观察.
3 指纹图谱结果
3. 1 影响展开效果的因素
1) 展开剂含水量对展开效果的影响不同含水量的微乳液对银杏黄酮A和B 某一成分移动影响(如图1).从图1可以看出,银杏黄酮的Rf值随着微乳液含水量增加而下降. 实验室样品GBE在微乳液含水量较高时的Rf值比对照品中国药品生物制品检定所的高.随着微乳液含水量的降低,两者的Rf值相差不大,当含水量为65%～75%时,两者Rf值相同.微乳液含水量与斑点形态的关系如表1所示.
关键词:银杏叶;黄酮;微乳液;薄层色谱;指纹图谱
银杏叶提取物( GBE)具有独特的药理活性及巨大的临床应用价值. 它的化学成分较为复杂,迄今为止已从银杏叶中分离出大量的极性和非极性化合物. 作为中药,如何评定其稳定性,建立客观的质量控制方法,成为亟待解决的课题之一.
国家药品监督管理局在中药注射剂质量标准中引入指纹图谱技术要求,指南中的“色谱指纹图谱”指采用柱色谱及薄层色谱等各种色谱技术实验研究的指纹图谱[ 1 ] . 对于银杏叶中药制剂的指纹图谱研究较少.游松等曾用HPLC方法建立了银杏叶药材、中间体及其注射剂的指纹图谱[ 2 ] . 但建立种方法须使用昂贵的高效液相色谱仪,且对银杏叶提取物(GBE)的纯度要求高,不易制得. 而薄层色谱作为中药的鉴别方法,由于其具有快速、分析成本低、尤其可以提供形象直观的彩色的图像,为其它色谱技术所不能的特点而为中药分析工作者广泛使用. 用于中药指纹图谱分析,它的这一优势得到充分发挥. 指纹图谱强调的是图谱的整体性和模糊性,它既可以表达有良好重现性的指纹特征,又能包容样品之间的差异. 用于GBE薄层色谱指纹图谱的文献尚未见报道.微乳液的研究是建立在胶束色谱理论[ 3 ]之上的.微乳液通常是由表面活性剂、助表面活性剂、油、水等组分在适当配比下自发生成的、无色透明低粘度的热力学稳定体系. 在微乳色谱中,溶质在固定相、油或水连续相及内核和介面膜等数相之间进行分配. 层附过程中,由于吸附、分配、静电、疏水、立体、萃取与反萃取等可能的效应,导致各种物质迁移速率不同而使Rf值有差异.
笔者以含水量不同的十二烷基硫酸钠- 正丁醇-正庚烷- 水微乳液[ 4 - 7 ]为展开剂进行薄层色谱分析方法,通过调节微乳系统的极性,较好地分离出十几种银杏黄酮得到了较好的指纹图谱. 这将有助于银杏叶药材的标准化种植,银杏叶提取物及其制剂的质量控制.
1 仪器与材料
1) 仪器与药品
薄层色谱紫外分析仪(天津市琛航科技仪器有限公司) 、自动点样仪(天津市琛航科技仪器有限公司) 、定量毛细管(天津市琛航科技仪器有限公司) 、双槽展开缸(重庆玻璃仪器厂) 、电吹风、聚酰胺预制板(台州四青生化材料厂) 、新型喷雾瓶(华西医科大学仪器厂) 、十二烷基硫酸钠( SDS) ,正丁醇,正庚烷,三氯化铝,乙醇均为分析纯.对照品:芦丁、槲皮素、GBE样品(均为中国药品生物制品检定所出品).
2) 实验材料
银杏叶, 2002年购于贵州大学.
2 实验方法
2. 1 展开剂系统的筛选
1) 传统展开剂系统
传统展开剂系统一般为油液系统,极性较小. 本实验用甲苯、醋酸乙酯和吡啶以不同比例作为展开剂,都仅能展开两三点. 不能较好分离银杏黄酮.
2) 微乳液系统的配制
按照十二烷基硫酸钠( SDS) ∶正丁醇∶正庚烷=13. 77 ∶15. 6 ∶2. 7 (重量比)称取各试剂,加少量水制成微乳液. 再依据微乳液的比例,加适量水,静置24 h备用.
2. 2 配制供试品GBE液
取不同批次的银杏叶,剪碎后用甲醇提取,收集甲醇提取液、干燥后为棕黄色粉末. 分别称取各批粉末适量配制甲醇溶液.
2. 3 配制对照标液
称取芦丁,槲皮素标准样品配制成1 mg/mL甲醇溶液,作为对照标准溶液.
2. 4 配制指纹图谱对照液
称取中国药品生物制品检定所提供的银杏叶黄酮样品配制成2 mg/mL甲醇溶液,作为对照品.
2. 5 高效薄层色谱方法
用定量毛细管吸取对照品溶液、对照标液、GBE样品液于聚酰胺膜上点样,直径约1 mm,吹干. 以不同含水量的微乳液为展开剂,于已饱和的双槽展开缸中展开10 cm,取出烘干. 均匀喷洒1%氯化铝乙醇溶液,烘干,于365 nm紫外灯下观察.
3 指纹图谱结果
3. 1 影响展开效果的因素
1) 展开剂含水量对展开效果的影响不同含水量的微乳液对银杏黄酮A和B 某一成分移动影响(如图1).从图1可以看出,银杏黄酮的Rf值随着微乳液含水量增加而下降. 实验室样品GBE在微乳液含水量较高时的Rf值比对照品中国药品生物制品检定所的高.随着微乳液含水量的降低,两者的Rf值相差不大,当含水量为65%～75%时,两者Rf值相同.微乳液含水量与斑点形态的关系如表1所示.